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尊龙凯时 RFL-6大鼠成纤维细胞培养指南

发布时间:2025-02-10   信息来源:纪蓝雪

尊龙凯时为您提供的RFL-6大鼠成纤维细胞培养指南,包括细胞的培养条件、处理步骤和注意事项,确保您在实验室中的细胞培养工作顺利进行。

尊龙凯时 RFL-6大鼠成纤维细胞培养指南

一、细胞培养条件

细胞名称:RFL-6大鼠成纤维细胞
生长特性:贴壁生长
冻存条件:无血清冻存液(货号:C7001)
培养体系:DMEM+10%FBS+1%双抗
传代方法:首次建议以1:2比例传代,传代情况每两天更换培养基。
备注:使用无菌离心管收集培养基以作对比培养,若效果不佳,建议直接购买尊龙凯时的完全培养基。

二、细胞收到后的处理

将细胞培养至良好状态后,灌满完全培养液并严密封口是确保细胞运输效果的最佳方法。收到细胞后,首先用75%酒精喷洒整个细胞瓶进行消毒,随后在超净工作台内进行无菌操作,并将细胞瓶放入37℃、5% CO2 的培养箱中稳定3-4小时以促进细胞适应。使用显微镜观察细胞的生长状况,并拍摄不同倍数的照片(最好有40x、100x、200x各一张),前三天的照片为售后服务的重要依据,未提供照片默认为状态良好。

三、细胞培养步骤

a. 细胞传代

如果未超过80%汇合度,将瓶装的完全培养液收集至离心管中,保留5ml完全培养基在37℃、5% CO2孵箱中培养;如果细胞密度超过80%,可进行传代。具体步骤如下:

  1. 弃去培养上清,使用不含钙、镁离子的PBS清洗细胞1-2次。
  2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml,置于37℃培养箱消化1-2分钟,显微镜下观察细胞状态,若细胞大部分变圆并脱落,迅速加入5ml以上完全培养基终止消化。
  3. 轻轻吹打细胞使其完全脱落后吸出,将悬液转移至15ml离心管中,在1000RPM下离心5分钟,弃去上清,补加1-2ml完全培养基重悬。
  4. 将细胞按1:2的比例分瓶传代(两个T25瓶),补充新的完全培养基至5-8ml/瓶,放入37℃、5% CO2的细胞培养箱中培养。

b. 细胞冻存

  1. 当细胞生长至覆盖培养瓶80%面积时,弃去T25培养瓶中的培养液,使用PBS清洗一次。
  2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml,观察细胞回缩变圆,加入5ml完全培养液终止消化,轻轻吹打细胞使其脱落,转移至15ml离心管中,在1000rpm离心5分钟。
  3. 弃去上清,沉淀细胞,加入1ml的无血清冻存液(货号:C7001),混匀后装入冻存管。
  4. 将冻存细胞放入-80℃冰箱,若后期需转入液氮罐中,需在-80℃冰箱存放超过24小时再转入液氮罐。

c. 细胞复苏

  1. 从液氮中取出细胞冻存管(注意佩戴防护面具),迅速置入37℃水浴中解冻,确保冻存管中没有结晶后,用75%酒精擦拭外壁。
  2. 将冻存管中的细胞移至含5ml完全培养基的15ml离心管中,1000rpm离心5分钟。
  3. 弃去上清,用5ml完全培养基重悬,接种至T25培养瓶,放入37℃、5% CO2 的细胞培养箱中。
  4. 第二天更换为新鲜的完全培养基继续培养。

四、注意事项

在运输过程中,由于某些细胞贴壁不牢,有可能导致细胞脱落,这是正常现象。若脱落较多,可将瓶中液体收集至离心管中,1000rpm离心5分钟,收集上清进行过渡培养(后期进行对比培养)。沉淀后加入胰酶1-2ml,轻轻吹打重悬,消化1-2分钟后加5ml完全培养基终止反应,再离心,弃上清,补加1-2ml完全培养基后,按1:2比例进行分瓶传代(两个T25),补充新的完全培养基至5-8ml,并放入37℃、5% CO2的细胞培养箱中进行培养。

五、售后条款

尊龙凯时为客户提供专业的售后支持,以下是细胞出现问题时的重发政策:

  1. 如细胞在运输途中存在问题,如丢失、瓶身破损、培养液严重漏液等,支持重发。
  2. 收到产品后48小时内如遇到细胞污染,请提供真实实验结果,核实后重发。
  3. 常温发货的细胞静置24小时或干冰冻存发货的细胞复苏后24小时未存活(需提供真实的细胞状态照片),可重发。
  4. 如出现污染,干冰发货的细胞复苏后24小时内或常温发货的细胞静置4小时后未开封,支持重发。
  5. 细胞活性问题,需在收到产品7天内提供真实实验结果,使用台盼蓝染色法鉴定活性,核实后重发。
  6. 客户需在收到当天或第2、3天提供照片,未及时告知的视为产品合格。若4-7天内有问题需提供前3天照片及相关操作详细步骤,与技术人员沟通后判断责任方的,技术人员将予重发。

对于不予重发的情况包括:因客户造成的细胞污染、操作不当、非推荐培养体系导致的细胞状态不佳等。具体情况由双方协商处理。在使用尊龙凯时的细胞时,请务必遵循相关操作规范,以确保实验的成功。