TurboTEV蛋白酶是一种增强型的半胱氨酸蛋白酶，来源于烟草蚀刻病毒（TEV）N1a蛋白的催化片段。它可以特异性地识别切割位点Glu-Asn-Leu-Tyr-Phe-Gln-Gly，并在Gln和Gly之间进行切割。TurboTEV蛋白酶在低温（4°C）下具有高度的稳定性和活性，且其活性不依赖于特殊缓冲液，能够在最适合目标蛋白的缓冲液中发挥作用。

TurboTEV蛋白酶的分子量为52kDa，带有GST和His标签，便于通过Ni螯合树脂或谷胱甘肽树脂进行标签去除。其活性可达到>10单位/µg，能够在30°C的条件下，1小时内裂解3µg底物的85%。

操作步骤

1. 在溶液中进行蛋白质裂解：

• A. 配制新鲜的冰冷透析缓冲液，例如25mM Tris-HCl (pH 8.0)，150-500mM NaCl，14mM β-巯基乙醇。
• B. 稀释目标蛋白样品池：可用透析缓冲液将目标蛋白稀释至1-2 mg/mL。如有聚集现象，可选择不进行此步骤。备用样品可用于后续分析。
• C. 按照1:100（w/w）的比例加入TurboTEV蛋白酶。
• D. 在4°C下透析过夜（大约16小时）。

2. 去除TurboTEV蛋白酶后的操作：

• A. 上柱进行分离。
• B. 可选的SDS-PAGE分析。

产品应用

• 蛋白质裂解功能。
• 从重组蛋白中去除融合标签。
• 蛋白质和肽的纯化。

常见问题 FAQ

1. TEV消化反应所需的缓冲液条件有多重要？是否存在任何成分可能会影响TurboTEV的剪切效率？

答：不推荐使用10%甘油、20mM组氨酸、500mM NaCl和100mM Tris。可以添加1mM DTT或β-巯基乙醇。

2. 在剪切之前，是否需要缓冲液交换蛋白质？

答：这可能是必要的。

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