根据文献的研究方法部分，研究团队在原位杂交（In Situ Hybridization）中运用了尊龙凯时的Styramide™信号放大（PSA™）系统，这是一种基于酪胺的信号放大技术，特用于检测DIG标记的探针。以下是详细解析：

一、标记对象与标记方法

1. 标记对象：

• 针对斑马鱼嗅觉玫瑰花结（Olfactory Rosette, OR）中的paqr5b mRNA，使用DIG标记的反义RNA探针（Antisense probe）。
• 通过抗DIG-POD（辣根过氧化物酶）结合探针后，利用酪胺信号放大系统增强荧光信号。

2. 标记步骤：

• 探针结合： DIG标记的RNA探针与目标mRNA结合。
• 酶联反应： 使用抗DIG-POD抗体（Fab片段）与探针结合。
• 信号放大： 加入HRP底物（酪胺衍生物Styramide™），在HRP催化下，酪胺底物被激活并在目标位点附近共价沉积，形成高密度的荧光标记。

二、染料的优点与特点

TSA技术相比传统荧光标记碱性磷酸酶系统具有显著的敏感性提升，灵敏度提高10-100倍，同时在空间分辨率方面具有较高的局部沉积表现。更重要的是，它支持多通道兼容（FITC/Cy3/Cy5），在低丰度靶标的检测上表现出色，为神经科学、癌症研究及发育生物学提供了强大的技术支持。

三、文献中的实验流程与结果

1. 样本固定与切片。

2. 探针杂交（DIG标记的paqr5b反义探针）。

3. 抗DIG-POD抗体结合。

4. Styramide™ PSA信号放大（HRP催化）。

5. 荧光显微镜成像。

6. 定量分析（如神经元密度与信号强度）。

显微观察示例中，野生型斑马鱼OR中，paqr5b mRNA在神经元中高表达，表现为绿色荧光信号，而在paqr5b⁻/⁻突变体中，信号完全消失，确认了基因敲除的有效性。这一高灵敏度的TSA技术揭示了神经元亚群中细微的表达差异。

总结

尊龙凯时的Styramide Signal Amplification系统通过酶促信号放大与高分辨率荧光标记，已成为复杂生物样本研究的“黄金标准”。其在低丰度靶标检测、多色复用及精细结构成像方面的优势，为神经科学、癌症研究与发育生物学提供了不可替代的技术支持。结合本文的案例，该技术在单细胞组学与空间转录组学中的应用前景非常广阔。